流式细胞检测技术发展和展望

流式细胞技术（flow cytometry，FCM）是利用  流式细胞仪  进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。现已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等的基础，临床研究和临床诊断等的各个领域。

多色系统通常有20个参数(FSC, SSC和18个荧光探测器)。有一些平台已经引入了更新的平台，配备5个或更多激光和30 - 50个参数，但这些不太常见。传统流式细胞仪最常用的激光有355 nm(紫外线)，405nm(紫色)，488 nm(蓝色)、532nm(绿色)、552nm(绿色)、561 nm(绿色-黄色)和640nm(红色)等。此外，还有一些仪器使用光电二极管(APD)取代了传统的PMT广电倍增管，进一步提高灵敏度。

流式细胞术发展历史

药物学：流式细胞术可以检测药物在细胞中的分布，研究药的作用机制，亦可用于筛选新药，如化疗药物对肿瘤的凋亡机制，可通过测DNA凋亡峰，Bcl-2凋亡调节蛋白等。

临床流式细胞分析已成为检验医学发展的一个热点，其发展趋势主要体现在以下几个方面。

分子表型分析（Molecular Phenotyping）是指用流式细胞技术检测细胞中特异性核酸序列或特异性基因异常。流式分子表型分析与免疫表型分析技术相结合，为所选择细胞亚群的特异性核酸序列（如癌基因、病毒核酸等）检测提供了一种非常有用的工具，具有广阔的应用前景。流式分子表型与免疫表型分析结合的基本技术路线是：①待测细胞首先与特异性细胞亚群的单克隆抗体反应，②固定并渗透细胞，③通过PCR进行引物特异的核酸序列扩增，④应用对扩增产物的特异性寡核苷酸荧光素标记探针进行荧光原位杂交（FISH），⑤加入针对细胞亚群单抗的荧光素标记的第二抗体。⑥流式细胞仪检测及数据分析。例如，流式细胞免疫表型与聚合酶链反应及荧光原位杂交（PCR-FISH）结合测定血液CD4+细胞中HIV特异的DNA或RNA，对于AIDS的病程监测、治疗反应以及预后等具有重要价值。

在非临床和临床生物制药研究领域中，反映药效的生物标志物研究数据通常通过设计一种细胞上的药物与药物作用靶点的受体占位实验而获得。受体占位实验有三种不同的形式：自由的，药物占据的和总受体的评估实验。

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胞内核内因子

细胞因子是由多种细胞产生的一组低分子量可溶性蛋白。它们包括白介素，干扰素，趋化因子，肿瘤坏死因子等，在调节人体的免疫反应中起重要作用。细胞活化的最终结果是产生细胞因子，根据检测指标和标本的不同，需要选择不同的刺激剂和刺激时间，以获得最佳的实验结果。下表提供了检测一些常用细胞因子的推荐的活化方法。