MPN疾病概况
骨髓增殖性肿瘤(MPN) 是以骨髓中一系或多系髓系（粒系、红系、巨核系）细胞持续异常增殖为特征的一组克隆性造血干细胞疾病。2016版WHO将MPN分四类：MPN伴嗜酸性细胞增多(MPN-Eo)、狭义的MPNs、系统性肥大细胞增生症(SM)和骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性肿瘤(MDS/MPN)。
排除BCR-ABL为代表的慢性粒细胞白血病外，狭义的经典型MPNs包括：真性红细胞增多症（polycythemia vera，PV），原发性血小板增多症（essential thrombocythemia, ET），原发性骨髓纤维化（primary myelofibrosis，PMF）。
经典型MPNs的诊疗路径
对于疑似MPN的患者，需进行病史、体检和常规筛查，进一步开展多种专科检查，例如骨髓涂片，染色体分析，免疫分型，骨髓活检，RT-PCR，基因突变检测等。对于ET、PV、PMF患者需要关注其危险度的分层。中国专家诊疗共识亦指出原发性骨髓纤维化的患者面临一系列临床问题，如贫血、脾脏肿大、体质性症状、症状性髓外造血等，尽早确认这些临床问题并给予相应处理，非常必要。
经典型MPNs亚型的诊断离不开多种检测的助力，尤其是骨髓病理和分子检测技术。参照WHO 对PV、ET和MF的诊断标准，需满足以下标准：
表1. 经典型MPNs的诊断标准
结合以上诊断标准，尝试梳理经典型MPNs的诊疗路径如下，其中JAK2、CALR、MPL三个驱动基因的突变检测对于MPN的分子诊断是非常必要的。
图1. 经典型MPNs的诊断路径
JAK2、MPL、CALR等驱动基因在MPN中的检测意义
JAK2，MPL，CARL基因突变均可引起JAK-STAT信号通路异常激活,被认为是BCR-ABL阴性MPN的驱动突变，赋予肿瘤细胞生存优势。
图2. JAK-STAT信号通路异常激活
（引自Mi-Ae Jang et.al. Korean J Intern Med 2020;35(1):1-11.）
在超过90%的PV、约50%-60%的ET、PMF患者中均可以检测到JAK2 V617F突变。在JAK2 V617F阴性患者中常可检测到JAK2 Exon12上的突变；JAK2 V617F突变的等位基因负荷增高与高血红蛋白水平、高白细胞水平、巨脾及血栓事件发生率增高等显著相关，高负荷的PV及ET患者进展为白血病及继发骨髓纤维化风险增高。
JAK2 Exon12突变见于部分JAK2 V617F突变阴性的PV患者，突变类型以缺失突变、错义突变等为主，最常见的有K539L、N542_543del、E543_544del。JAK2 Exon12突变的PV患者常表现出更高的血红蛋白水平，血小板及白细胞计数较低，但两者在血栓事件发生情况、骨髓纤维化转化风险及死亡率方面无显著差异。
文献报道，67%~88%的JAK2突变阴性ET或PMF患者可检出CALR Exon9突变，最常见的突变类型为L367fs*46，(1型)和K385fs*47，（2型），两者在总的突变中分别占45%和41% 。CALR突变阳性的PMF患者血小板计数更高，血红蛋白水平更高，血栓发生率更低，总体生存期更长。
MPL基因常见突变类型为W515L和W515K，W515A、W515S、W515R、S505N，可见于3%~5%的ET和8%~10%的PMF患者。携带MPL突变的ET患者表现为血小板水平增高，血红蛋白水平较低，动脉血栓形成风险较高，总体生存时间较短。
除驱动突变外，MPN患者常能检测到其它基因突变，如ASXL1、TET2、IDH1/2、TP53、EZH2等，这些基因突变在髓系肿瘤中均有不同频率的报道，非MPN驱动特异性。MPN患者中常检测到不止一种突变。随着年龄的增长，部分基因突变在大于50岁的健康人群中也有出现和累积，出现克隆性造血。存在多种基因突变时, 细胞中的多种克隆突变相互作用, 疾病的表型和动态发展都展现出强烈的异质性。
因此，针对经典型MPNs患者，分子诊断中对JAK2、MPL、CALR等驱动基因突变的检测最为必要；若条件允许，可对非驱动基因开展检测。
迈劼康-迈杰转化医学针对经典型MPN的分子诊断产品
迈杰转化医学研发了人JAK2-V617F基因突变检测试剂盒（荧光PCR法），商品名：迈劼康(注册证编号：国械注准20213400222），用于临床经典型MPN的辅助诊断，为国内JAK2 V617F检测的首款三类试剂盒。
该检测试剂盒采用扩增阻滞突变系统（ARMS-PCR）技术结合荧光探针检测特异性扩增产物；附加错配突变设计在3’端引物序列中，以特异性识别突变并扩增，通过识别扩增产生的荧光分子进行检测，结果准确可靠。
图3. ARMS-PCR原理
该试剂盒具有以下检测优势：
灵敏：最低检测限低至10ng/25μl, 0.3%突变率（约9 copy/25uL的突变基因可被检出）；
简便：检测时间快，提取到结果只需3小时；
多平台支持：同时适用ABI 7500及宏石Slan两种qPCR平台。
操作流程：
参考文献：
[1] 真性红细胞增多症诊断与治疗中国专家共识（2016年版）. 中华血液学杂志，2016，37（ 4 ）: 265-268
[2]《真性红细胞增多症诊治中国专家共识(2016)》解读. 中华血液学杂志, 2016,37(10): 852-857
[3] 成人原发免疫性血小板减少症诊断与治疗中国专家共识（2016年版）. 中华血液学杂志.2016,37(2):89-93.
[4] 原发性骨髓纤维化诊断与治疗中国专家共识(2015年版). 中华血液学杂志, 2015,36(09): 721-725.
[5] Mi-Ae Jang et.al. Korean J Intern Med 2020;35(1):1-11.
[6] ASCO- 2012-EDU-BOOK
[7] Chao M P , and Gotlib J Blood 2014;123:1438-1440
[8] Grinfeld J, et al. N Engl J Med 2018;379:1416–30.
[9] J Lee et al. Blood Rev 9 May 2020, 100708 online ahead of print